Probleme frecvente atunci când omogenizatorul cu ultrasunete rupe Escherichia coli

E. coli exprimă proteine străine. Când este sonicat, acesta este suspendat în PBS conținând 1% triton-X-100. Efectul ultrasonic este mai bun. Efectul de 1% triton-X-100 este încă evident. Lucrări, cum ar fi Streptomyces.

Precipitarea bacteriană se adaugă direct la proba 1buffer, se adaugă 5ml de mercaptoetanol, se amestecă, se centrifughează, se fierbe timp de 10min, iar etapele de încărcare directă, colorare și decolorare sunt după cum urmează: se pune cleiul în cantitatea adecvată de lichid vopsitorie în cuptorul cu microunde timp de 1min, soluția este înlocuită cu o cantitate mare Apa poate fi gătită în cuptorul cu microunde timp de 10 minute.

După exprimarea proteinei recombinante, celulele au fost perturbate cu ajutorul undelor ultrasonice, folosind o baie de gheață, 400 W, și 2S oprit pentru 1S, dar o cantitate mare de spumă a fost generată într-un timp scurt, ceea ce a afectat eficiența strivuirii. Atât pbs, cât și tampoanele tris au fost aceleași și, în sfârșit, zdrobirea a fost incompletă. Dar proteina mea țintă este în aceste celule neîntrerupte, ceea ce mă face să nu obțin rezultate experimentale.

Permiteți-mi să vă dau o analiză a motivelor acestei situații și a soluției.

1. Bulele vor fi generate deoarece poziția sondei dvs. nu este poziționată bine, sonda trebuie să fie aproape de fund, aproximativ 1 cm (de obicei, sunt de 0,5 cm de jos), instrumentul va avea nivele diferite de putere, dar puteți observa pagina, există fluctuații dar nu fi prea agresiv.

2. Super 3S oprește 10S, ultrasunete de aproximativ 20 de ori pentru a vedea efectul

3. Acordați atenție poziției cornului. Dacă nu sunteți corect, ar trebui să îl ajustați în timp. În plus, din perspectiva concentrației de bacterii, încercați să creșteți volumul atunci când zdrobiți, puterea nu trebuie să depășească 60%.

4. Încearcă 8S pentru Super 8S. Pentru unele proteine bacteriene, metoda dvs. este dificil de a disipa căldura, rezultând denaturarea proteinelor și generarea de bule. Cel mai bine este să vă întrerupeți puțin. Acest lucru este mai frecvent în formă de organisme de includere.